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摘要

背景：非洲猪瘟是一种高度传染性的病毒性疾病，存在于大多数撒哈拉以南非洲国家。布基纳法索在2003年经历了第一次非洲猪瘟爆发。本研究旨在确定布基纳法索非洲猪瘟(ASF)疑似猪的血清流行率。

结果：在研究期间，在疑似猪中观察到非洲猪瘟病毒感染的总体血清阳性率为16.1% (75/466,95% CI: 0.119-0.208)。非洲猪瘟病毒感染的血清阳性率因地区(中部19.6% vs上盆地3.3%，p < 0.001)和养殖系统(现代养殖场46.7% (43/92)vs传统养殖场8.6%(32/374)，差异有统计学意义(p < 0.001)。使用三种ELISA试剂盒对研究期间随机抽取的230份血清进行分析，结果显示，INGENASA®(西班牙马德里)、IDVET(法国Grabels)和SVANOVIR®ASFV-Ab(瑞典乌普萨拉Svanova)试剂盒的血清阳性率分别为9.1%(21/230)、4.8%(11/230)和6.5%(15/230)。

结论本研究结果显示，非洲猪瘟在疑似病例中的血清流行率很高，特别是在布基纳法索的现代农场，并因地区而异。在缺乏针对非洲猪瘟感染的疫苗的情况下，有必要让所有利益攸关方参与加强监测，开展有关农场生物安全措施的宣传活动，以便及早发现感染并迅速加以控制，以防止可能发生的具有灾难性经济后果的非洲猪瘟动物流行病。

关键字

非洲猪瘟，现代农场，传统农场，血清患病率，布基纳法索

缩写

非洲猪瘟;CERBA: Pietro Annigoni生物分子研究中心;乙二胺四乙酸;ELISA:酶联免疫吸附试验;粮农组织:粮食及农业组织;LABIOGENE:分子生物学与遗传学实验室;line: Laboratoire National d’elevage;MRA:资源和动物部;OIE:世界动物卫生组织;RESUREP:国家动物疾病监测组织; WHO: World Health Organization

介绍

在布基纳法索，牲畜是仅次于棉花的第二大出口收入来源，对该国国内生产总值的贡献超过10%[1]。在过去的15年里，布基纳法索的养猪业有了显著的增长，使其成为西非仅次于尼日利亚的第二大猪肉生产国[2-4]，根据FAOSTAT(2016)，猪群为2350430头。这种活动在城郊和城市地区非常重要，但在农村地区最为重要，因为大城市从那里获得廉价的动物蛋白[5]。猪现在是包括农村社区妇女在内的非常贫困人口的永久收入来源[1]。2008年的农业总清查显示，畜牧业雇用了39.2%的妇女。根据FAO[2]，天主教会引入的现代养猪使女性和男性处于平等地位。此外，在农村地区，猪基本上由妇女管理，她们拥有60%的农村猪，在一些地区(中西部)，这一比例可高达90%。事实上，这是女性唯一可以自主开展的活动[2]。

猪群的特点是在最基本的传统系统中饲养的小型家庭畜群和食腐猪，最常见于发展中国家的城市和农村地区[6]。在这种散养系统中，猪在房屋和周围地区自由漫游，并在街上、垃圾填埋场或邻近土地或村庄周围的森林中觅食。很少为猪提供住房[5]。根据当地的情况，猪可能在一年中大部分时间是自由的，在雨季被关起来。它们可以在晚上被安置在一个小庇护所里，以保护它们免受盗窃和捕食者的侵害。饲养食腐猪需要低投入使用和低劳动力投入，通常仅限于购买食物或疫苗[4]。

在这种情况下，动物容易感染许多病原体，包括非洲猪瘟病毒。今天，猪发展的主要制约因素仍然是非洲猪瘟，这是一种高度传染性的猪病毒性疾病，于1921年在肯尼亚首次记录，并在大多数撒哈拉以南非洲国家广泛传播[7,8]。非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是一种复杂的猪传染病，被世界动物卫生组织列为法定传染病。考虑到涉及软蜱(鸟蜱属)和无症状非洲野猪(主要是疣猪)的森林循环，该病毒在无非洲猪瘟地区新传入或再传入的风险很高。[9]。在非洲也出现了没有疣猪参与的家猪/蜱虫周期和家猪/猪周期[10]。

这种疾病是由一种DNA病毒(Asfivirus的唯一成员Asfarviridae家庭[11]。目前还没有针对非洲猪瘟的疫苗，而且由于缺乏对病毒株多样性程度的了解以及根据感染宿主的病毒株赋予特异性免疫的病毒抗原的了解，进展受到阻碍[12]。非洲猪瘟病毒的遗传特征清楚地表明病毒感染的流行病学复杂性，特别是在非洲东部和南部，有24种不同的基因型被描述，目前至少有25个非洲国家报告了非洲猪瘟疫情[13]。东部和南部非洲的ASFV具有高度遗传变异性，有22种不同的p72基因型，而西非ASFV分离株具有高度同质性，分类为单一的p72基因型I。在非洲以外，基因型I是欧洲、美洲和加勒比地区唯一发现的基因型，直到最近在高加索和俄罗斯引入基因型II病毒[10]。西非第一例非洲猪瘟病毒感染病例于1959年在塞内加尔报告[14]。近年来，非洲猪瘟在Côte、科特迪瓦、贝宁、尼日利亚、多哥以及最近在冈比亚、加纳和马达加斯加的爆发摧毁了猪群[13,15,16]。

非洲猪瘟被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的疾病，布基纳法索于2003年在该国与加纳、多哥和贝宁接壤的东部地区首次暴发了非洲猪瘟;这些疫情通过宰杀和补偿生猪得到了控制[17]。自今年以来，国家动物疾病监测网络(RESUREP)在该国不同地区永久通报了几起病例。目前，在布基纳法索没有关于非洲猪瘟感染野生板的报告。

尽管非洲猪瘟通过猪的直接损失和市场限制对经济造成灾难性影响，但没有进行任何研究来概述该国的非洲猪瘟流行情况，即使已知传入西非国家的血清型是血清型I病毒，而且由于它们都是p72序列，因此可以确定布基纳法索病毒的病毒类型，但需要进行更多的研究。本研究的目的是对布基纳法索的非洲猪瘟进行调查，并根据养殖系统和省/地区对非洲猪瘟疑似猪进行血清学检测。这将通过建立流行病学地图来更新非洲猪瘟情况，以便采取适当的控制措施来保护猪群并提高其生产力。

材料和方法

研究地点

布基纳法索是一个位于西非中心的萨赫勒国家，与贝宁、Côte科特迪瓦、加纳、马里、尼日尔和多哥接壤。农业和畜牧业是该国经济的重要组成部分，全国分为45个省和13个地区。

本研究是通过RESUREP进行的;该网络有104个称为兽医站的监测站，战略性地分布在该国的45个省和13个地区。所采用的抽样方案是基于从兽医站获得的信息以及传统和现代农场的猪死亡率警报。2014年至2016年期间布基纳法索地区不同采样点的地理分布情况。

研究设计

2014 - 2016年，在不同省份/地区的现代和传统养殖场进行了一项横断面研究，以确定疑似病例或临床症状提示可能感染非洲猪瘟病毒的猪的血清感染阳性率。在研究期间，RESUREP兽医站通过月度报告通报了该国11个地区16个省24个地方的非洲猪瘟疑似病例。从省(区)内不同养殖场共采集了416份血清样本，并送至实验室进一步分析。

除了RESUREP通知外，2014年2月至2015年11月期间，瓦加杜古和博博-迪乌拉索近郊地区还通报了11起现代农场猪死亡警报。实验室技术人员和一名流行病学家调查了这些警报并收集了包括50份血清在内的生物样本。研究期间警报的日期见表1。

表格1。研究期间省/地区的警报日期

地区	省	位置	警报日期
中心	Kadiogo	Koubri	2月13日th, 2014年 8月12日已经, 2014年 8月26日th, 2015年
		Saaba	6月12日已经, 2014年 6月1日圣, 2015年
		Nioko二世	6月2日nd, 2015年
		Wapassi /瓦加杜古	11月24日th, 2015年
Centre-Sud	Bazega	Sapone	2月10日th, 2015年
Hauts-Bassins	参观	Banakeledaga	9月25日th, 2014年
		参观	10月7日th和20th, 2015年

传统的农场

这些都是非常小的家庭农场，有2到10头猪，其中绝大多数是流浪猪(90%，被称为“跑猪”)。他们重视家庭垃圾[1]莳萝(小米啤酒的副产品)和所有其他废物和作物残留物，他们在收获后在村庄和田野里走来走去。

它们是大型农场，在建筑、设备或牲畜设施方面的基础设施投资很少或根本没有。这种类型的农场使用当地品种的猪，在农村地区更为重要，因此有可能以较低的成本向城市和农村提供动物蛋白。

现代农场

这些是经过改良的、密集的或半密集的资产，加上基础设施投资。这些农场位于城市和城郊地区，其中一些使用进口的外来猪种。布基纳法索只有一种当地品种，叫做“porc coureur”。现代农场用来提高生产力的主要外来品种是来自象牙海岸的“科霍戈”和来自英格兰的“大白”。我们还可以在一些农场找到来自英国的“汉普郡”、来自丹麦的“兰德赛”、来自美国的“杜洛克”和来自比利时的“皮特兰”。在现代农场观察到动物在高放养密度下的禁闭，其问题包括生物安全条件下的粮食生产效率。这些农场越来越专业化，由猪肉行业的参与者组成了一个组织。

样品收集

样本采集时间为2014年2月至2016年2月。负责监测和采集标本的兽医驿站人员分别在游离抗凝真空容器和EDTA管中主要从颈静脉采血，其次从隐静脉和耳静脉采血，然后分别用于后续的血清和血浆采集。在Eppendorf微管中收集的血清在1500 rpm下离心5分钟，去除微量红细胞和杂质，然后在-20°C保存，直到用于酶联免疫吸附试验(ELISA)。在怀疑或警戒调查时采集样本，在可能进行尸检时采集多个样本(血清和/或器官)。单个农场收集的血清数量从2到10不等，根据农场的猪群，并考虑到有时大多数猪已经死亡或很快售罄。

在怀疑的情况下，通常从共享同一环境的自由放养系统中的2至5个不同农场收集样本。

在研究期间，一些地点被访问了两次(Saaba, Dano, Nioko和sapon)或三次(Bobo-Dioulasso, Koubri)，我们认为这些地点是非洲猪瘟的持续区。

实验室分析

ELISA检测采用ID Screen®非洲猪瘟间接抗体ELISA试剂盒(IDVET, Grabels，法国)，按照制造商提供的方案进行。除此之外，将IDVET Kit结果与另外两种ELISA商用试剂盒(INGENASA®(西班牙马德里)和SVANOVIR®ASFV-Ab(瑞典乌普萨拉Svanova))在2014年至2016年期间随机抽取的230份血清样本上获得的结果进行比较。

统计分析

数据在Microsoft Excel 2013上记录，并使用Epi Info 7.0软件进行分析。比较采用卡方检验，显著性阈值设为p < 0.05。使用R软件通过“二值表”确定血清患病率的95%置信区间。content函数的“library (binom)”和“exact”方法。

结果

疑似猪的非洲猪瘟血清流行率

在这项研究中，在研究期间报告的所有疑似病例中，ASF病毒感染的总体血清患病率约为16.1% (75/466,95% CI: 0.129 - 0.198)(表2)。在RESUREP通报的416例疑似病例样本中，患病率为15.6% (65/416,95% CI:在瓦加杜古和Bobo-Dioulasso近郊地区的现代猪场，在猪死亡警报后记录的20.0%(10/50)阳性病例中，观察到ASF病毒感染血清阳性的猪为0.123 - 0.195)。

表2。2014年至2016年RESUREP和警报中疑似病例的非洲猪瘟流行情况

省/地区		样品					ELISA结果
		RESUREP (N)		警报(N)		总计	底片。	Pos。	Seroprevalence
省	地区	曼氏金融	特遣部队	曼氏金融	特遣部队	所有	n	n	％
Bazega	Centre-Sud	0	6	2	2	10	8	2 *	20.0
Houet	Hauts-Bassins	0	86	0	6	92	89	3.	3.3
Bougouriba	西南部	0	31	-	-	31	31	0	0.0
Boulkiemde	Centre-Ouest	0	15	-	-	15	15	0	0.0
Ioba	西南部	0	15	-	-	15	12	3.	20.0
Kadiogo	中心	38	55	21	19	133	103	30 * *	22.6
Kompienga	美国东部时间	0	28	-	-	28	23	5	17.9
Koulpelogho	Centre-Est	0	17	-	-	17	15	2	11.8
Lorum	北方	0	5	-	-	5	5	0	0.0
Namentenga	中央——北部	0	18	-	-	18	15	3.	16.7
Oubritenga	Plateau-Central	0	13	-	-	13	13	0	0.0
Poni	西南部	5	0	-	-	5	2	3.	60.0
Sanguie	Centre-Ouest	26	0	-	-	26	14	12	46.1
Seno	荒漠草原	0	12	-	-	12	6	6	50.0
Topoa	美国东部时间	0	23	-	-	23	17	6	26.1
Ziro	Centre-Ouest	0	23	-	-	23	23	0	0.0
总计		69	347	23	27	466	391	75	16.1

*两例阳性病例来自现代农场;**26例阳性病例(RESUREP阳性18例/38例，警报阳性8例/21例)来自现代农场;MF =现代农场;TF =传统的农场。底片。= -Pos。=积极。

在报告的疑似病例中，非洲猪瘟感染的血清阳性率因地区而异，最高频率记录在血液病(46.1%;12/26)和Seno (50.0%;6/12)和Poni (60.0%;3/5)省。中部地区的感染率明显高于上盆地地区(22.6例[30/133]对3.3例[3/92]，p < 0.001)。在该研究人群中，19.7%(92/466)的疑似病例来自现代农场，而80.3%(374/466)来自传统农场。现代养殖场疑似病例的ASF病毒感染率(43/92)显著高于传统养殖场疑似病例(32/374)(46.7% vs 8.6%;P < 0.001)。

ELISA试剂盒对比试验

将本研究中用于不同ELISA分析的IDVET试剂盒(Grabels，法国)与另外两种ELISA试剂盒(INGENASA®(马德里，西班牙)和SVANOVIR®ASFV-Ab (Svanova，乌普萨拉，瑞典)进行比较测试。使用这三种试剂盒随机抽取230份血清进行分析，结果显示INGENASA®(西班牙马德里)、IDVET(法国Grabels)和SVANOVIR®ASFV-Ab(瑞典乌普萨拉Svanova)试剂盒的血清患病率分别为9.1%(21/230)、4.8%(11/230)和6.5%(15/230)。

虽然INGENASA®试剂盒获得了相对较高的血清阳性率，但这三种试剂盒获得的血清阳性率之间没有统计学差异(INGENASA®vs IDVET, p = 0.067, INGENASA®vs SVANOVIR®ASFV -Ab, p = 0.298)。不同试剂盒得到的结果如表3所示。

表3。三种ELISA试剂盒检测结果比较

位置	血清数量	分析结果
		INGENASA工具包		IDVET工具包		SVANOVIR ASF抗体试剂盒
		Pos。	底片。	Pos。	底片。	Pos。	底片。
Nakamtenga	13	0	13	0	13	0	13
波波Dioulasso	29	4	25	3.	26	4	25
Koubri	8	5	3.	2	6	1	07
端午	15	0	15	0	15	0	15
Kompienga	13	0	13	0	13	0	14
Kindi	14	1	13	0	14	0	14
Bittou	20.	3.	17	1	19	0	20.
Gampela	12	0	12	0	12	0	12
Boulsa	10	0	10	0	10	0	10
Reo	10	0	10	0	10	1	09
Banakeledaga	30.	0	30.	0	30.	0	30.
Sapone	3.	0	3.	0	3.	0	03
Saaba	2	0	2	0	2	0	02
多丽	7	1	6	0	6	2	05年*
Sabou	1	0	1	0	1	0	01
Wapassi	10	0	10	0	10	1	09
Tikare	5	0	5	0	5	0	05
Kantchari	23	4	19	3.	20.	5	18
Yamtenga	5	3.	2	2	3.	1	04
总计	230	21	209	11	218	15	215

*1对Dori的样品结果不确定;底片。= -Pos。=积极。

讨论

非洲猪瘟是一种高度传染性的病毒性疾病，发病率为100%，死亡率为0%至100%，取决于与病毒、宿主和接触途径有关的因素。

该疾病通过直接损失动物和限制市场造成严重的社会经济影响。本研究的目的是通过RESUREP和现代猪场的猪死亡警报来确定疑似病例中非洲猪瘟的血清患病率。

在研究期间，非洲猪瘟病毒感染的总体血清阳性率为16.1%(75/466)，其中现代养殖场感染病例为46.7%(43/92)，传统养殖场感染病例为11.7%(32/374)。本研究的高总体血清阳性率是由于这样一个事实，即调查是直接在有可能感染非洲猪瘟病毒的临床症状的猪身上进行的，而现代猪场的高感染频率表明生物安全水平较低[17]。现代养殖系统要求猪在封闭环境中繁殖，动物数量较多，这也是解释这种高流行率的因素。肯尼亚早期的一项研究也报告了不同牲畜系统的患病率差异[18]。本研究中观察到的16.1%的患病率与2006年塞内加尔报告的16.9%(126/747)相似[14]。然而，它低于2013年在肯尼亚屠宰猪中观察到的53.0%的流行率[19]。最近在Côte科特迪瓦进行的一项研究通过PCR方法证实了布基纳法索猪样本中存在非洲猪瘟病毒感染[20]。事实上，传统饲养方式下的猪走失、栖息地土壤条件、饲料来源、缺乏预防护理和养殖场生物安全水平低是非洲猪瘟传入和传播的主要危险因素[4,20,21]。尽管现代养猪场在养猪业现代化方面更有组织性和投资，但生物安全措施的应用不足。我们可以注意到饲料和供水系统不足。饲料到农场和动物到屠宰场没有特定的运输系统。进入农场通常很容易，雇员有时会误用或避免实施较少的生物安全措施。

他们也是在农场周围出售的猪肉的大消费者，他们负责的几乎是现代化的农场将他们的动物卖给猪肉屠夫，动物通常在屠宰场屠宰，尸体经过兽医检查并由冷藏车辆运输。此外，在布基纳法索的农村和城市地区，猪肉被广泛消费。猪来自全国各地，运输工具不足，有时与其他动物或人混在一起。它们在临时市场上卖给烘焙师和屠夫，通常在屠宰场屠宰，或者在缺乏卫生条件和没有兽医检查的情况下秘密屠宰[16]。在开阔地区(主要是在村庄)秘密屠宰生猪，可能会在狩猎季节在家猪和野猪之间传播非洲猪瘟等疾病;此外，狩猎的野生板准备和肉在村里消费。家猪也可以食用野猪尸体的副产品。这种情况增加了两个种群之间ASF传播的风险[2]，即使没有对野猪种群进行调查。

在本研究中，非洲猪瘟病毒感染的血清阳性率在研究期间因省、地区而异。事实上，在研究期间，中部地区的患病率(22.6%)明显高于上盆地地区(3.3%)。在塞内加尔的研究中，Etteret al。(2006年)报告的患病率在Fatick、Kolda和Ziguinchor地区分别为13.3%、7.8%和22.1%。不同地区之间的差异表明非洲猪瘟流行病学的复杂性[13,22-24]。

目前研究的猪群中有超过80.3%(374/466)来自传统猪场，19.7%(92/466)来自现代猪场。这些观察结果证实了传统育种系统在布基纳法索养猪生产中的优势。事实上，据粮农组织估计，布基纳法索90%的牲畜采用传统畜牧业生产，猪肉产量为85%[2]。

在本研究中，使用INGENASA®、IDVET和SVANOVIR®ASFV-Ab试剂盒获得的血清患病率分别为9.1%、4.8%和6.5%。目前用于检测抗非洲猪瘟抗体的ELISA商用试剂盒主要有三种，包括INGEZIM PPA COMPAC、INGENASA公司的K3，在欧洲国家使用最为广泛[25]。目前用于诊断非洲猪瘟的技术可在任何流行病学情况下提供可靠的结果。然而，非洲猪瘟病毒感染的诊断是复杂的，并不总是容易的，因为临床形式广泛。事实上，结果的差异主要取决于每种检测的敏感性和特异性[26]。盖拉多et al。[25]表明，ELISA测试无法检测到INGENASA-ELISA试剂盒抗体滴度低于1/640、IDVET和SVANOVA测试抗体滴度低于1/5210的感染猪。作者还报道了与IDVET和SVANOVA试验相比，INGENASA试验检测抗asf抗体的敏感性高，特异性低[25]。因此，ELISA试剂盒的选择可能会导致对非洲猪瘟病毒感染的血清患病率的高估或低估，有时需要通过聚合酶链反应(PCR)直接检测血液中的病毒。事实上,·et al。[18]报道了28%的猪通过PCR检测呈非洲猪瘟病毒感染阳性，但没有检测到临床症状，所有猪在世界动物卫生组织推荐的ELISA检测中均为血清阴性。本研究使用IDVET试剂盒进行血清患病率估计，该试剂盒在三种检测试剂盒中患病率最低(4.8%对6.5%和9.1%)。这表明在我们的研究人群中可能有较高的血清患病率。这一观察结果需要使用一种更具体和敏感的方法来证实，即PCR直接检测疑似猪的病毒DNA。

结论

这项研究的结果表明，非洲猪瘟在布基纳法索的血清流行率很高，并因地区和养殖系统而异。

这些结果支持这样一个事实，即兽医部门认为该疾病是该国的地方性传染病。在缺乏该疾病疫苗的情况下，有必要让所有利益攸关方参与加强监测，开展关于农场生物安全措施的宣传运动，以便及早发现感染病例并迅速加以控制，以防止可能发生的非洲猪瘟流行病，造成灾难性的经济后果。

数据和材料的可用性

本研究中使用和/或分析的数据集可应通讯作者的合理要求向其提供。

相互竞争的利益

作者宣称他们没有竞争利益

资金

这项研究是根据第18375号研究合同进行的，该合同涉及题为“布基纳法索非洲猪瘟(ASF)的血清学和分子流行病学”的研究项目，该项目与题为“跨界动物疾病的早期快速诊断和控制——第二阶段:非洲猪瘟”的协调研究项目有关国际原子能机构(IAEA)。

作者的贡献

全球语言监测机构和JS *构思和设计了这项研究。全球语言监测机构,JS和埃克参与数据的生成、收集和汇编。全球语言监测机构和赤穗参与数据分析和解释。全球语言监测机构，赤穗，做y，JS，埃克，SM，袄,签证官，胡和JS *参与起草或修改手稿。全球语言监测机构，胡和JS *提供行政、技术和物资支持。监督这项研究的是全球语言监测机构，赤穗和JS *。所有作者都严格修改并批准了本出版物的最终版本。

鸣谢

作者谨感谢研究期间兽医服务总干事Lassina OUATTARA博士为研究项目的实施提供了便利。他们还感谢在收集可疑非洲猪瘟病例样本方面作出贡献的现场监测站人员和在疫情调查期间进行全面合作的农场所有者。

[1]祖传的啤酒，由红高粱或发芽的小米发酵而成，在水中煮熟，在非洲萨赫勒地区非常普遍。

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